二胡一般采用泛音進行調弦，具體方法是：左手小指按住弦長（指千金與琴馬之間的線段）的1/2處，運弓拉響外空弦音后，然后將小指輕浮，這時會得出一種純凈透明、類似竹笛聲的外空弦高八度音，它與渾厚圓潤的外空弦音形成一種強烈的色彩對比，當弓子在外弦上拉滿一弓后，現在弓毛又轉為擦內弦，這時小指離弦，用食指輕浮于全弦的1/3處，隨著弓子的漸漸推進，此時會發出一種細膩清越，比內空弦高十三度的琴聲，其音量略小于外弦1/2處的八度泛音。如果內外弦的五度音是調準了的，這兩處的泛音音高應完全相等；如果它們之間的音高還存在著偏差，這說明五度音的準確度還不夠。如果不求絕對音高，只要求相對音高的話，我們可以以任意一根弦的泛音音高為“參照音”，然后把另一根弦指定位置的泛音音高調到相等高度為止
　　初次練習泛音，內弦1/3處泛音效果很可能不如外弦1/2處理想，這也許是內弦推弓的力度不如拉弓容易控制，可改變方式試試。初次練泛音，會發出煩燥刺耳的“殺雞殺鴨”聲，這可能是三方面原因造成的：一是弓毛擦弦用力不勻，二是觸弦位置（即泛音點）不對，三是指頭觸弦是采用的實按。努力從這三個方面去改進，就有可能發出透明清越的泛音來。
　　除了用泛音來校對二胡的定音外也可用其它固定音高樂器來幫助二胡定音。像鋼琴、口琴、笛子及音笛、音叉等都可以用來定音，但選用這些樂器來定音一定要從二胡這件樂器的發音性能來考慮，過高過低都會影響演奏效果。過高則由于琴弦的張力大，使琴皮承受的壓強超過了規定限度，振動極不協調，就會導致發音干枯單調，還會大大縮短琴弦琴皮的使用壽命；定得過低由由于琴弦過于松弛，琴皮共振效果差，造成發音晦澀暗淡、同時因琴弦失去必要的張力，使指頭觸弦時缺乏相應的反作用力，音準也不易控制。